隨著糖尿病發(fā)病率的增加，DN患者日益增多，因其發(fā)病隱蔽，進(jìn)展緩慢，如果任其發(fā)展，當(dāng)臨床上出現(xiàn)持續(xù)性蛋白尿時(shí)，腎臟病變已不屬早期，腎臟已出現(xiàn)了不可逆的病變，再用藥物也無法逆轉(zhuǎn)。因此，早期發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病有其十分重要的意義�，F(xiàn)簡要介紹三種糖尿病腎病的早期實(shí)驗(yàn)診斷方法。

一、尿微量白蛋白檢測

(一)方法：競爭酶聯(lián)抑制法。

(二)實(shí)驗(yàn)步聚：

1、用撲克制的抗菌素人白蛋白包被塑料板。

2、加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原或待測樣品，37℃溫育30分鐘。

3、加入底物溶液和終止液，通過酶標(biāo)儀比色，即可算出待測標(biāo)本濃度。

(三)結(jié)論：

此法快速簡便，非常適合臨床常規(guī)使用。但是其缺點(diǎn)是DM患者中尿微量白蛋白的陽性率較低，在Ⅱ型糖尿病病人中，陽性率不足20%。

二、尿銅藍(lán)蛋白檢測

(一)方法：酶聯(lián)免疫吸附測定法。

(二)實(shí)驗(yàn)步驟：

1、銅藍(lán)蛋白抗體包被，冰箱過夜。

2、加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原或待測樣品，37℃溫育1小時(shí)。

3、加入酶標(biāo)銅藍(lán)蛋白抗體，37℃溫育1小時(shí)。4、加入底物溶液和終止液，在酶標(biāo)儀上讀取A值，即可算出待測標(biāo)本濃度。

(三)結(jié)論：

該方法進(jìn)行了精確性和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，方法比較穩(wěn)定可靠。并對114名DM患者的尿銅藍(lán)蛋白含量及尿微量白蛋白含量進(jìn)行相關(guān)分析，兩者呈正相關(guān)，且在尿微量白蛋白陰性的糖尿病病人中，仍有49。5%的病人尿銅藍(lán)蛋白陽性。因此，尿銅藍(lán)蛋白質(zhì)檢測很有可能成為DN早期的較第三診斷指標(biāo)。

三、尿白蛋白片段的檢測

(一)方法：免疫印跡法。

(二)實(shí)驗(yàn)步驟：

1、尿樣與樣品處理液等量混合，置沸水浴3分鐘。2、聚丙烯酰胺凝膠電泳，每孔加樣20μι，電壓200V。3、將膠上的蛋白帶轉(zhuǎn)印到硝基纖維素膜上，轉(zhuǎn)印電流340mA，2小時(shí)后取出，封閉1小時(shí)。4、加入白蛋白抗體和酶標(biāo)白蛋白，冰箱過夜。5、加入顯色液，出現(xiàn)蛋白帶為陽性，未見蛋白帶為陰性。

(三)結(jié)論：

通過實(shí)驗(yàn)得出凡是尿白蛋白陽性者，尿白蛋白片段也為陽性，而尿白蛋白陰性者中，仍有30%為尿白蛋白片段陽性。曾有人對后者進(jìn)行隨訪觀察，發(fā)現(xiàn)他們中有18%發(fā)展為尿白蛋白，蛋白陽性。因此，認(rèn)為尿白蛋白片段具有更高的特異性和早期栓出率，能更早地發(fā)現(xiàn)DN患者。

綜上所述，除尿微量白蛋白檢測是目前人們較為公認(rèn)的DN早期診斷指標(biāo)外，其它兩種都還在觀察及研究中。目前國內(nèi)外還沒有建立尿銅藍(lán)蛋白酶聯(lián)免疫測定方法，市場上買不到試劑盒，其作用機(jī)理還待于進(jìn)一步深入研究。免疫印跡法分析尿白蛋白片段，在我院已應(yīng)用于臨床，對尿白蛋白陰性者，再用本法檢測分析，可以更有效地避免早期糖尿病腎病的漏診，是預(yù)測腎臟病變的更為早期，更為靈敏的指標(biāo)。